脱纤维绵羊血是什么？血平板标准制备原理与实验室规范科普

在微生物实验室日常检测中   ，血琼脂平板（血平板） 是使用率极高的基础培养基 ，主要用于苛 养菌培 养、菌落形态观察与溶血特性鉴定。而制作合格血平板的核心 原料   ，就是脱纤维绵羊血。

很多实验室常混淆   “   抗凝羊血 ” 与   “   脱纤维羊血 ”   ，也常因温度、操作、原料选型错误   ，导致平板底 色溶血、溶血结果误判、菌株生长不良。本文依据国标及通用实验室 SOP  ，系统科普脱纤维绵羊血特 性、血平板制作标准流程、溶血判定标准与常见实操误区。

一、什么是脱纤维绵羊血 ？

脱纤维绵羊血   ，指无菌采集健康绵羊全血   ，通过物理方式去除纤维蛋白   、不添加任何化 学抗凝剂与防 腐剂的实验级血液原料。

核心制备原理

新鲜血液凝固的核心物质是纤维蛋白原。

实验室通过无菌玻璃珠震荡搅拌   ，使纤维蛋白缠绕析出并 被物理去除   ，血液失去凝固能力   ，全程无 EDTA 、柠檬酸钠、肝素等化学添加。

和抗凝羊血的关键区别

•   抗凝羊血：   靠化学试剂抑制凝血   ，会改变离子环境、干扰溶血素反应   ，严 禁用于标准血平板制备

•   脱纤维羊血：纯物理脱纤   ，保留完整红细胞、血红蛋白   、 X 因子、 V 因子   ，不干扰细菌生长与溶血 判定

脱纤维绵羊血核心特性

1.   无抗生素、无防腐剂、无抗凝剂   ，适配绝大多数细菌培养

2.   绵羊红细胞膜稳定、溶血分界清晰   ，是食品 、临床微生物国标首选原料

3.   储存条件： 2_8 ℃冷藏避光   ，绝对禁止冷冻（冷冻会直接导致红细胞破裂溶血报废）

 

二、血平板（血琼脂平板）   的作用

血平板属于非选择性高营养培养基   ，依据《 GB 4789.28-2013 培养基和试剂质量要求》规范 使用 ，主 要两大核心用途：

1 、培养苛养细菌

普通营养琼脂营养有限   ，链球菌、李斯特菌、肺炎链球菌等 营养要求高的菌株无法良好生长。

脱纤维绵羊血可补充天然生长因子   ，保障苛养菌正常繁 殖。

2 、鉴别细菌溶血特性（菌种鉴定关键依据）

溶血现象是微生物鉴定的重要指标   ，行业统一分为三类：

•   β - 完全溶血：   菌落周围出现透明无色圈   ，红细胞被完全破坏

•   α - 不完全溶血：   菌落周围呈现草绿色浑浊圈   ，为血红蛋白氧化产物

•   γ - 不溶血：   菌落周围培养基无任何变化   ，无溶血 现象

三、国标级血平板标准制作流程（可直接对标 SOP ）

依据 GB 4789.28-2013 微生物培养基制备规范   ，完整标准步骤如下：

步骤 1 ：配制血琼脂基础培养基

选用哥伦比亚血琼脂基础或标准豆粉琼脂基础   ，按比例溶解于纯化水   ，加热煮沸至完全透明无颗粒。

步骤 2 ：高压灭菌

121 ℃、  103kPa 高压灭菌 15 分钟   ，彻底杀灭杂菌与芽孢。

步骤 3 ：精准控温（成败核心）

灭菌后培养基放入水浴冷却至 45_50 ℃

•   温度＞  55 ℃：烫破红细胞   ，平板底色发红溶血报废

•   温度＜  40 ℃：琼脂提前凝固   ，血液混合不均 、   出现花斑结块

步骤 4 ：无菌添加脱纤维绵羊血

超净台无菌操作   ，按  \\5%_10% 常规  7%\\  比例加入脱纤维绵羊血   ，轻柔颠倒混匀   ，禁止剧烈震荡， 避免机械性溶血、产生气泡。

步骤 5 ：无菌倾注平板

水平台面倾注   ，控制琼脂厚度 4_5mm  ，静置自然凝固。

 

步骤 6 ：质控检验

成品平板 35 ℃空白培养 18_24h  ，无杂菌污染、底色清亮   ，即为合格   ， 2_8 ℃密封避光保存   ，建议一周 内用完。

四、实验室高频错误与避坑指南

1.   用抗凝羊血做血平板

抗凝剂会螯合金属离子、抑制溶血素活性   ，直接导致溶血结果假阴性   ，属于严重实验错误。